溫度是其中首要的物理參數。上皮組織的離子通道活性和主動轉運過程都高度依賴溫度。實驗溫度通常設定為模擬生理條件（如37°C），但整個灌流系統內的溫度均一性需要被持續監控。從儲液瓶到灌流小室之間的管路，若未進行有效保溫，可能導致溶液到達組織表面時溫度已發生偏離。更重要的是，兩個半室之間的溫差會引發熱滲透效應，產生虛假的電位差，干擾對真實離子轉運電流的判斷。

 

　　溶液流速和剪切力是另一個常被忽視的維度。灌流系統通過氣升或泵驅動使緩沖液在組織兩側流動，以模擬體內液體流動狀態并提供氧氣。然而，流速不宜過快，過高的流速會對組織表面產生物理剪切力，可能損傷上皮細胞的微絨毛結構，或觸發機械敏感性離子通道，改變細胞的基礎電生理特性。流速過慢則可能導致組織表面出現濃度極化現象，局部離子濃度改變，影響驅動離子轉運的電化學梯度。

 

　　系統的靜水壓平衡是尤斯實驗的關鍵。兩側半室內的液面高度必須精確保持一致。任何高度差都會形成一個靜水壓梯度，驅動液體通過細胞旁途徑從高壓側向低壓側流動。這種凈流體流動不僅會稀釋一側的標記物濃度，更會形成對流的電勢，疊加在跨上皮電位上，導致對主動離子轉運過程的錯誤解讀。因此，在安裝組織和調節液面時，需要借助水平儀或壓力傳感器進行精確校準。

 

　　電極的位置和固定方式也影響測量。測量電極應盡可能靠近組織表面，以減少溶液電阻帶來的電位降影響。但電極又不能觸碰到組織，以免造成物理損傷。電極的穩定固定也很重要，微小振動可能改變電極與溶液的接觸界面，引入噪聲。此外，用于連接電極的鹽橋，其填充溶液的成分和濃度應與實驗緩沖液匹配，且避免產生液接界電位。系統對地接地的良好狀態也極為關鍵，否則工頻干擾會嚴重影響微弱的生物電信號采集。